Архив рубрики «Диагностика»
С нашей точки зрения, наиболее чувствительным является именно последний тест, т. е. проводимый на шестой день культивирования. Обычно удается найти партию СПК, которая в концентрации 2,5-10 поддерживает индуцированную митогенами пролиферацию, вызывая при этом минимальное фоновое включение тимидина или образование БОК. Следует также отметить, что соответствующие тесты можно проводить и в бессывороточных средах, как это описали Исков и Мелхерс Iscove, Melchers, 1978. Для культивирования используют пластмассовую стандартную посуду и панели. Предварительно активированные культуры вносят или в лунки на 2 мл панелей фирмы Costar, или в культуральные матрасы. Повторное культивирование ведут в плоскодонных лунках панелей для микротитрования, причем при работе с панелями, производимыми разными фирмами, никаких различий не наблюдается. Если для подсчета клеток или для мечения радиоактивными аминокислотами необходимы большие количества клеток, для рекультивирования можно использовать панели Costar с лунками объемом 2 мл. г. Клетки фракционируют в градиентах как фиколла, так и перколла. Обычная клеточная суспензия, приготовленная из селезенки мыши, содержит клетки, различающиеся по плотности в соответствии с различными стадиями активации.
Недавнее секвенирование генома энтеробактерии P. luminescens, являющейся симбионтом нематод и патогеном для многих насекомых Duchaud Е. et al.2003, позволило идентифицировать регион, гомологичный Ы-локусу HPI Yersinia. Десять из jfo-генов у Y. pestis имеют гомологи в P. lumines- cens. Генетическая организация кластера из 5 генов от irp2 до уЫЕ консервативна у обоих видов, в то время как порядок и размещение других 5 генов различны. Идентичность аминокислотных последовательностей продуктов Y. pestis и P. lumi- nescens составляет от 26 до 55. Генетические маркеры островов патогенности, такие как Р4-подобные int, hef, asn tRNA, attB-L и attB-R, не были обнаружены у P. luminescens. Это говорит о том, что, как и HPI-подобный элемент у Y. pestis, ybt-локус не входит в состав острова патогенности у Р. luminescens. Однако, содержание GC. уЫ-подобного локу- са 48значительно выше, чем у ядерного генома 42. 8подтверждая, что этот локус был получен путем горизонтального переноса. Обнаружение HPI у патогенных Yersinia способствовало выделению подгруппы высокопатогенных штаммов. Более выраженная идентичность HPI генов Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis по сравнению с другими хромосомными генами и различная генетическая организация этих HPI свидетельствуют, что HPI был приобретен двумя видами независимо и горизонтально после их дивергенции от предка Yersinia около одного миллиона лет назад Achtman М. et al.1999. Однако из-за высокого консерватизма HPI генов у Y. pestis и Y.