С нашей точки зрения, наиболее чувствительным является именно последний тест, т. е. проводимый на шестой день культивирования. Обычно удается найти партию СПК, которая в концентрации 2,5-10 поддерживает индуцированную митогенами пролиферацию, вызывая при этом минимальное фоновое включение тимидина или образование БОК. Следует также отметить, что соответствующие тесты можно проводить и в бессывороточных средах, как это описали Исков и Мелхерс Iscove, Melchers, 1978. Для культивирования используют пластмассовую стандартную посуду и панели. Предварительно активированные культуры вносят или в лунки на 2 мл панелей фирмы Costar, или в культуральные матрасы. Повторное культивирование ведут в плоскодонных лунках панелей для микротитрования, причем при работе с панелями, производимыми разными фирмами, никаких различий не наблюдается. Если для подсчета клеток или для мечения радиоактивными аминокислотами необходимы большие количества клеток, для рекультивирования можно использовать панели Costar с лунками объемом 2 мл. г. Клетки фракционируют в градиентах как фиколла, так и перколла. Обычная клеточная суспензия, приготовленная из селезенки мыши, содержит клетки, различающиеся по плотности в соответствии с различными стадиями активации.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

− 1 = 1